Pro5® MHC I 类五聚体。美丽理性的 Pro5® MHC 五聚体的美丽合理设计在其五聚体卷曲螺旋核心一端的平面中呈现五个 MHC 肽复合物，在核心另一端的第二个平面中呈现五个检测标签
包括牛津大学和 ProImmune 在内的中国和英国国际团队合作发表的论文，识别和表征了恢复期患者的 SARS-CoV-2 特异性 T 细胞反应：
Peng Y., Dong T., et al. (2020). “Broad and strong memory CD4+ and CD8+ T cells induced by SARS-CoV-2 in UK convalescent COVID-19 patients”. https://www.nature.com/articles/s41590-020-0782-6
Figure 1. HLA-B*40:01 限制性 NP322-331 (MEVTPSGTWL) 特异性 T 细胞的记忆表型和分化状态。 PBMC 被分离并用 NP/B*40:01 五聚体复合物和 T 细胞分化标志物染色，并使用流式细胞术进行分析。 A) CCR7 和 CD45RA 分化标志物在 CD8+ 五聚体+ T 细胞上的表达。 B) CD8+ 五聚体+ T 细胞上CD27 和CD28 分化标志物的表达。
在这短片中，董涛教授（牛津大学）描述了她在新冠病毒患者的抗原特异性记忆 T 细胞反应中的最新研究，介绍了她团队最近发表的 Nature Immunology 文献引用了 Pro5® 五聚体在她们研究工作中:
如果您对董涛教授的工作感兴趣并想了解更多信息，请点击链接访问我们对 Tao 的采访，了解她在 T 细胞免疫学方面的职业生涯以及最近在 SARS-CoV-2 方面的工作
Ferdosi S. R. et. al. (2019). “Multifunctional CRISPR-Cas9 with engineered immunosilenced human T cell epitopes” Nature Communications 10, Article number1842
Figure 2. Pro5® 五聚体特异性 SpCas9 免疫显性表位特异性 CD8+T 细胞识别在锚残基突变后被取消。 (a) 在用肽 β 脉冲的抗原呈递细胞刺激的 PBMC 中使用 β 特异性 Pro5® 五聚体检测表位 β 特异性 CD8+T 细胞反应。 (b) 当健康供体 B 细胞 APC 用突变肽 β2 脉冲时，CD8+ Pro5® 五聚体β+T 细胞的百分比降低到 0.3%。 表：在锚定（第 2 个和/或第 9 个）残基突变之前和之后，表位 α 和 β 的位置、序列和 IEDB HLA 结合百分位等级。 Sb，归一化结合分数； Si，标准化免疫原性评分。
Webb J. et. al. (2010). “Profound elevation of CD8+ T cells expressing the intraepithelial lymphocyte marker CD103 (αE/β7 Integrin) in high-grade serous ovarian cancer.” Gynecological Oncology 2010, Volume 118, Issue 3, Pages 228–236
Figure 3. 对肿瘤抗原 NY-ESO-1 特异的 CD8+ T 细胞主要是 CD103+。 来自 HLA-A2+ EOC 患者 (IROC013) 恶性腹水的 T 细胞的流式细胞术分析，该患者表现出对 NY-ESO-1 的 HLA-A2 限制性表位的反应性。分析显示 CD8+ 淋巴细胞染色呈 A*02:01/SLLMWITQV (NY-ESO-1157–165) Pro5® 五聚体阳性的频率。五聚体阳性 CD8+ T 细胞进一步表征 CD103 表达（右图）。所有事件首先通过前向和侧向散射对总淋巴细胞群进行门控。
当您尝试检测稀有的抗原特异性 T 细胞群时，您将了解拥有灵敏、准确并提供可重复结果的研究工具的重要性。MHC I 类五聚体专为这些目标而设计。它们直接结合特定特异性的 T 细胞受体，由主要组织相容性复合体 (MHC) 等位基因和肽组合决定。Pro5® 五聚体可用于检测和分离抗原特异性 CD8+ T 细胞群，少至 0.02% 的淋巴细胞。它们也适用于详细的表位表征和进一步的免疫监测。
与其他来源的 MHC 多聚体质量和稳定性各不相同，Pro5® 五聚体受益于卓越的设计，并符合专业标准。每个五聚体在经过几个严格的质量控制步骤之前都经过四次纯化。使用五聚体技术，您可以获得准确且可重复的结果。
研究中使用的 Pro5® 五聚体显示 HIV 上调检查点抑制，导致以 TGIT 为标志的 T 细胞耗竭
Chew GM et al. (2016). “TIGIT Marks Exhausted T Cells, Correlates with Disease Progression, and Serves as a Target for Immune Restoration in HIV and SIV Infection.” PLoS Pathog 12(1): e1005349. doi:10.1371/journal.ppat.1005349
Figure 4. CD8+ 末端效应 T 细胞和 HIV 特异性 CD8+ T 细胞上的 TIGIT 表达，这些细胞与各种 Pro5® MHC I 类五聚体共染色。
“Pro5® MHC 五聚体在我们关于移植后癌症和病毒感染的过继免疫疗法的研究中发挥了重要作用。我们使用五聚体来检测和量化临床使用的 CTL 细胞系中的抗原特异性 T 细胞群。我们还使用它们检测移植患者外周血中的抗原特异性 CTL，CTL 输注前后。选择五聚体是因为它们的稳定性以及与 MHC 四聚体相比阳性群体的强度和特异性增加。我们发现 Pentamers 一致且可靠，ProImmune 的客户服务非常出色。”
直接标记的五聚体在 4°C 下储存，使用起来方便快捷。它们在分析单个供体样品的多种肽特异性方面特别有价值。单个供体样品可以同时染色并通过用标记的五聚体进行双重或三重染色来分析多种特异性。这会生成更完整的免疫反应概况，同时减少染色所需的细胞总数。R-PE 标记的、APC 标记的和生物素标记的五聚体的任何组合均可用于此目的。未标记的五聚体可以在 -80°C 下储存，并在这种条件下保证 12 个月，使其非常适合长期研究。在研究开始时对大量五聚体进行内部验证，无需每隔几个月重新验证新试剂批次，从而节省时间。未标记的五聚体为用户提供了额外的染色灵活性，因为相同的复合物可以与许多不同的荧光染料一起使用。此功能使实验设计更具适应性，尤其是在选择针对细胞表面标志物或仅提供某些颜色的细胞内蛋白质的抗体时。
Figure 5. MHC 多聚体染色与外周血 (PBMC) 样品的 CD8 FITC。用Pro5® MHC 五聚体或 MHC 四聚体染色 1 x 105 PBMC，对显示的每种抗原具有特异性。该图显示了活细胞，并展示了当细胞被五聚体与四聚体染色时的灵敏度和平均荧光强度的增加。
Pro5® 五聚体可提供 50、150 和 500 个测试数量。如需更大批量，请咨询。
Pro5®五聚体的综合染色方案可在 Pro5®五聚体手册和方案页面上找到。
下载五聚体手册
Pro5® 五聚体分析应与 CD8+ T 细胞群的共染色一起进行。所有五聚体都可选择在带有 FITC 标记的抗 CD8 单克隆抗体（人或小鼠）的试剂盒中提供。试剂盒中提供的抗体克隆已经过与五聚体产品结合使用的卓越性能测试，并作为单独的等分试样提供。这使用户能够滴定抗体以找到最佳工作稀释度。我们的目录中有数百种不同的五聚体特异性，包括癌症和传染病的表位，如 CMV、EBV、HBV、HCV、HPV、流感等。Pro5® 五聚体目录表
如果您选择的特异性不在我们的范围内，可提供与目录项相同格式的定制 Pro5® 五聚体。我们的技术专长和制造数千种不同 MHC 肽复合物的经验意味着我们能够高效地提供定制试剂，并取得很高的成功率。定制五聚体的价格包括特定定制肽的合成。如果我们确信肽与相关 MHC 等位基因充分结合，ProImmune 只会继续合成定制的五聚体。如果 www.syfpeithi.com 上的亲和力得分为 21 或更高，通常会进行合成。如果有足够的支持证据可用于结合，将考虑较低评分的肽。
ProImmune 为所有目录肽特异性和定制 Pro5® 五聚体提供匹配的肽。匹配的肽以 1 或 2 毫克的量冻干提供，保证纯度 >70%（免疫级）。它们适用于体外 T 细胞刺激实验，与单独的标准定制肽合成相比，可以以更低的成本购买。匹配的肽可在不到一周的时间内发货。
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GSK 团队使用 Pro5® 五聚体研究可预防多种流感病毒株的 mRNA 疫苗
Magini D. et al. (2017). “Self-Amplifying mRNA Vaccines Expressing Multiple Conserved Influenza Antigens Confer Protection against Homologous and Heterosubtypic Viral Challenge.” PLOS One
Figure 6. 流感攻击后肺部的 NP 特异性 CD8+ T 细胞反应。对 BALB/c 小鼠进行 i.m 免疫。两次，间隔 8 周，使用 PBS、0.1 μg 自扩增 mRNA (SAM®) 载体 SAM(NP)、SAM(M1)、SAM(M1-NP)，或使用 0.2 μg SAM(NP)+SAM( M1)。第二次免疫后4周，小鼠感染PR8病毒。感染后在肺部募集的 NP 特异性 CD8 T 细胞通过流式细胞术进行表征。 (a) 使用 Pro5® MHC 五聚体测定的 NP 特异性 CD8+ T 细胞数量。数据来自个体小鼠（描绘为点），而实线表示平均值±SD。 (b) Ag 特异性、分泌细胞因子的 CD8+ T 细胞的累积频率，表示为每肺的绝对数量。如图所示，颜色代码表示在用培养基 (m)、NP147-155 肽 (NP) 或 M1 肽库 (M1) 体外刺激后由各个细胞产生的细胞因子的不同组合。 (c) 对于 CD107a，NP 特异性 CD8+ T 细胞的绝对数量呈阳性（黑色条）或不呈阳性（灰色条）。数据来自两个独立和合并的实验。使用 Mann-Whitney U 检验进行统计分析。 *p<0.05； **与 PBS 处理组相比，p<0.01。
缩写摘要:目前基于血凝素 (HA) 的季节性流感疫苗会诱导疫苗株特异性中和抗体，这些抗体通常不能防止不匹配的循环病毒。包含诸如核蛋白 (NP) 和基质蛋白 1 (M1) 等保守蛋白可以通过引发交叉反应性 T 细胞来提高有效性。然而，有效启动 T 细胞反应需要正确的递送系统。在这里，我们展示了新型自扩增 mRNA (SAM®) 载体，表达流感 NP (SAM(NP))、M1 (SAM(M1)) 和 NP 和 M1 (SAM(M1-NP)) 与脂质纳米颗粒 (LNP) 一起传递诱导强大的多功能 CD4 T 辅助 1 细胞，而含有 NP 的 SAM 也诱导细胞毒性 CD8 T 细胞。还测量了中央记忆 (TCM) 和效应记忆 (TEM) CD4 和 CD8 T 细胞的稳健扩张。在流感感染后，在 SAM(NP) 免疫小鼠的肺中观察到 NP 特异性细胞毒性 CD8 T 细胞的募集增加，这与肺病毒滴度和病理学降低平行，并在同源和异亚型流感攻击后增加了存活率。我们首次证明 RNA (SAM(M1-NP)) 和蛋白质 (单价灭活流感疫苗 (MIIV)) 的共同给药是可行的，同时诱导 NP、M1 和 HA 特异性 T 细胞和 HA -特异性中和抗体，以及增强的 MIIV 针对异源攻击的功效。
Pro5® MHC I 类五聚体用于研究 MS 脑组织中 EBV 相关的 CD8+ T 细胞免疫病理学聚体使用在研究 EBV 关联 CD8+ T 细胞免疫病理学
Serafini B. et al. (2019) ,“Epstein-Barr Virus-Specific CD8 T Cells Selectively Infiltrate the Brain in Multiple Sclerosis and Interact Locally with Virus-Infected Cells: Clue for a Virus-Driven Immunopathological Mechanism” J. Virol., Dec 19 Vol 93, Issue 24 e-00980-19
Figure 7. 来自 HLA-B*0801+ MS 供体的脑切片中 EBV 五聚体结合细胞的可视化。来自两个 HLA-B*0801+ MS 供体的连续脑切片用针对 CD8 和 CD20 的 MAb 以及与 EBV 肽偶联的 Pro5® MHC 五聚体进行染色。 （A 和 B，供体 MS234）包含 CD8 T 细胞 (A) 和一些结合 B*0801/EBNA3A 五聚体 (B) 的细胞在活动性 WM 病变中的血管周围袖带。 （C 到 G，供体 MS121）包含分散的 CD8 T 细胞 (C)、紧密排列的 CD20 B 细胞 (D) 和几个结合 B*0801/BZLF1 五聚体的细胞（E；面板 F 显示了在图 E 中的高倍放大镜框）在活动性 WM 病变的外围；在同一袖带中，与 HLA 不匹配的 A*0201/LMP2 五聚体 (G) 孵育后未观察到染色。细胞核用苏木精染色。条形，100 μm（D 和 G）和 50 μm（A 到 C、E 和 F）。
本研究的简要结论:本研究的目的是验证 EBV 特异性 CD8 T 细胞通过介导对持续性脑内 EBV 感染的免疫病理学反应参与 MS 中的中枢神经系统组织损伤的假设，这在先前的研究中有所记载。关键发现是 EBV-特异性 CD8 T 细胞常见于 MS 脑中，并且比 CMV 特异性 CD8 T 细胞更频繁，这通过用一系列 EBV 和 CMV 特异性 Pro5® MHC 五聚体进行组织染色证明。此外，CD8 T 细胞识别流感未检测到病毒或推定的 CNS 自身抗原。这些数据表明，EBV 特异性 CD8 T 细胞进入 MS 大脑是由于主动募集而不是由于局部炎症过程导致的非特异性外渗。
