新型生物疗法可能会造成输注相关的反应在病人上，直到做了第一次临床试验之后才会显得明显。在 FDA 最近建议的指导对于免疫原性评估蛋白质治疗产品：“体外评估蛋白质治疗产品的容量在于介导细胞活化，包括增殖和细胞因子生产在人的全血或外周血单个核细胞都会被推荐” 事前在临床试验。
FDA 也在最近的指导对于药物和生物制品免疫毒性潜力的非临床安全性评价说明了 “使用未刺激的人类细胞在平板结合（或其他可以评估受体交联贡献的测定）和可溶性形式中使用适当的阳性和阴性对照评估由治疗性蛋白质引起的细胞因子释放综合征的可能性。这些检测被认为对危害识别至关重要”。
药物进入临床试验前，为了提供更多资料给制药公司，ProImmune 开发了 ProStorm®，一个体外细胞因子释放化验能够协助在预测第一输注反应的可能性。在这几年来，ProStorm® 细胞因子释放化验都被应用各种不同的生物治分子，例如多肽肽到蛋白质，单克隆抗体，抗体药物偶联物，双特异性，疫苗，还有等等的复杂新型生物实体的化验数据都经常把报告上交给监管机构，比如 FDA。
对于遵循 FDA ANDA（缩写新药申请）监管途径的仿制药肽产品，申办者必须证明仿制药合成肽中的活性成分与先前批准的肽中的活性成分相同。该分析的一个关键要素是证明药品中存在的任何杂质都不会引起不需要的先天（或适应性）免疫原性。作为一种灵敏的全血检测，ProStorm® 非常适合解决您产品开发中的这些关键和紧迫问题。
ProStorm® 是个快速技术服务能够达到大概 4 周就能够让您及时决定您的发展计划。
为了达到最好的成绩， 我们通常选出一组捐赠者配合您的项目要求用全鲜血样本特定对于您的项目。通常，我们会用至少 20 个健康捐赠者，但是如果有特别需要，我们也能够寻找捐赠者患上的条件。
这个化验可以设定用全鲜血，外周血单个核细胞和药物在溶解情况下或固定的情况下，取决于客户的要求。我们常规地实行这种化验在不同的格式。
我们用您准备的药物在一个浓度范围设计来模仿高峰暴露在第一输注的时候。
我们把您准备的药物放进全血或外周血单个核细胞样本，孵化之后，恢复血清来测量细胞因子。通常，我们都会测量 TNFα, IFNɣ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8 and IL-10，但是会和您咨询然后选出最好的测量。细胞因子浓度使用优化的免疫测定技术来测定一个准确的量化。我们团队分析您的数据给您能够做出您下一步的实验决定。
我们会提供两种标准分析 – 数据显示反应从您的一组捐赠者通过细胞因子对于在每一个药物和浓度，和底线标准分析在于表明潜在风险。
Figure 1. ProStorm® 成绩。细胞因子反应数据对于 IL-6。反应是来之一组 29 个捐赠者，用了 （左到右）Remicade®，Erbitux®，Campath®，Herceptin®，Vectibix® 激活在一个浓度范围。中位数用了红线表明。特别值得注意是 Campath® 和 聚集 Remicade® 的高量反应。
此外在数据显示细胞因子反应在于您整全部的捐赠者对于每一个药物和剂量组合测试，我们也显示了底线分析。在这个分析的测试样品治疗通常和 Erbitux® (Cetuximab) 做比较，因为这是我们知道引出第一输注相关的反应有低发生率。
底线（红线表明）可以根据百分之 95 在于测试组反应对低反应性比较药物。这个底线然后应用在其他测试样品的数据。捐赠者反应高过底线都显示清除（填充蓝点）。
这个分析方法特别强大当用在涵盖各种药物浓度和当用在大群的捐赠者。这个成绩显示从 29 个捐赠者，和显示 IL-6 反应对于100ug/ml 药物。
Figure 3. Erbitux® 反应和百分之 95 底线应用在不断增加的药物浓度，IL-6 反应从 29 个捐赠者组。
我们通常也包括 Campath® （Alemtuzamab）因为使用这个单克隆抗体关联到高发生率在于第一输注反应。
Figure 4. Campath® 反应和 Erbitux® 百分之 95 底线应用底线应用在不断增加的药物浓度，IL-6 反应从 29 个捐赠者组。
一个特别吸引人的功能关于这个化验是能够适合评估完全配方的疗法。这允许变化的影响轻易的被评估。在我们其中一个探索性研究在 ProImmune，我们调查细胞因子的反应对于 Infliximab (Remicade®) 和聚集 Remicade®。数据（Figure 5）明显显示了反应性增强在于鲜血对于聚集配方。
Figure 5. Remicade® 和聚集 Remicade® 反应和 Erbitux® 百分之95底线应用底线应用底线应用在不断增加的药物浓度，IL-6 反应从29捐赠者组。阳性反应者表明成填满的数据点。
Figure 6. 在一个范围对于市场上知名的治疗药物，在临床观察到的发病率在于细胞因子释放反应有很好的相关性在于 ProStorm® 化验成绩和细胞因子释放的临床发生率之间。
答：了解潜在的细胞因子释放的危害是对每一个预期性临床试验是重要的。如果危害确定在化验上，通常需要可得到的选项来减轻进入诊所的危险。这通常包括，调整剂量范围，延长药物释放时间，改变服药方式，规划细胞因子释放的临床疗效的治疗，再次看制造药物的生产/ 填充完成过程的相关问题。
答：最适合的化验取决于调查的测试样本还有在不同的环节会建议多过一种测试格式。有些早期的文献提到血液分析化验的敏感性没有比外周单个核细胞高。通常我们相信这并非如此还有我们的优化全血化验显示了非常好的敏感性在于已知引起细胞因子释放的商业药物。在没有操纵鲜全血的测试系统弄得这个版本成为有吸引力的测定方法。
复合肽药物可以通过重组或合成制造工艺生产。在开发新型或通用肽时，开发人员必须证明药物产品中存在的任何杂质（这些可以是宿主细胞衍生的、直接与肽相关的杂质（即截短或插入的氨基酸）或其他非肽相关的杂质）杂质）不会造成可能导致原料药免疫原性的免疫激活风险。
在涉及通用肽（如胰高血糖素、利拉鲁肽、特立帕肽、替度鲁肽、奈西立肽等）的情况下，开发人员有责任证明：
对于此类通用肽的开发人员来说，这可能是一个令人生畏的前景，因为提供这种证据所需的技术能力通常在内部不可用。随着我们知识的深入，监管要求不断发展，您需要与值得信赖的合作伙伴合作。 ProImmune 在这一特定领域拥有超过 10 年的经验，我们将在快速的时间内以全球监管机构定期审查的格式为您提供高质量的可靠数据。
评估先天和适应性免疫原性风险有两个关键组成部分。
先天免疫原性风险评估
先天免疫反应是人体抵御病原体的第一道防线，通常是快速的。在肽相关或工艺相关杂质的背景下，风险在于这些杂质可能会触发抗原呈递细胞上的模式识别受体 (PRR)，从而激活先天反应途径，导致细胞活化、细胞因子的产生和启动适应性免疫反应。这是产品免疫原性的标志。
在 ProImmune，我们部署了 ProStorm® 细胞因子释放检测来评估这种风险。这是一种新鲜的全血检测，由经过培训的抽血医生从一组健康志愿者中抽取血液，专门用于您的研究，然后在抽血后仅 3 小时内与测试材料一起孵育。在 24 小时的潜伏期后，血浆中与先天免疫激活相关的一组 7 种细胞因子被量化。在您的肽药物存在的情况下，证明该检测的适当灵敏度非常重要。为此，我们将一系列浓度的先天免疫反应调节杂质 (IIRMI) 加入样本子集。这些 IIRMI 是不同 PRR 的激动剂，通常包括 TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、Dectin-1 和 NOD2。确认负责响应这些杂质的细胞（例如树突状细胞）的活力也很重要，因此我们还可以在研究中对此进行流式细胞术验证。
通常，在该测定中比较多批次（最少 3 个）通用和 RLD 肽。考虑不同的 API 批次、批次到期日期以及地理批次放行等因素也很重要。
适应性免疫原性风险评估
肽相关杂质可能由无意中增加对 MHC 分子（I 类或 II 类）的亲和力的氨基酸序列组成。如果 MHC 呈递的肽杂质随后在适当的共刺激环境下被同源 T 细胞受体识别，则 T 细胞适应性免疫反应将被激活。这会导致显着的免疫原性。
ProImmune 有两种分析格式来评估这些不同的风险因素。第一个是 ProImmune REVEAL® MHC 肽竞争结合试验，它可以确定通用肽与 RLD 结合与一组 MHC II 类等位基因的亲和力。
第二种是功能性 ProMap® T 细胞增殖测定，它在添加肽后在一组不同的健康供体 PBMC 中使用流式细胞仪读数在 7 天的过程中测量总 T 细胞增殖。
两种分析均可用于查看特定杂质的影响，或将通用肽批次与 RLD 进行比较。
在这篇简短的（23 秒）感言中，Narasimha Rao（Dr. Reddy’s Laboratories ）描述了他与 ProImmune 合作使用 ProStorm® 细胞因子释放检测和 ProMap® T 细胞增殖检测来评估合成肽药物和杂质的免疫原性风险的经验。
完整的演示文稿可以在这里查看
如果您想要所描述的任何检测的样本报告副本，或者想要以保密方式讨论您自己的项目要求的技术细节并收到成本建议书，请随时联系我们的免疫学专家团队将很高兴为您提供帮助。
可在此处找到 FDA “某些高度纯化的合成肽药物产品的 ANDA 指代 rDNA 来源上市药物”的完整指南：https://www.fda.gov/media/107622/download
