ProT2® Class II 类四聚体
ProT2® 四聚体能让您准确的使用流式检测独一抗原特异性 CD4+ T 细胞。ProT2® 四聚体也能够分离细胞用来培养，扩张和开展进一步研究。ProT2® 四聚体也能让您更深入的研究 CD4+ T 细胞免疫反应在许多不同的病毒领域包括自生免疫性，癌症和感染病毒。ProT2® 四聚体是我们 ProImmune 经验的团队合成。这个团队就是一直以来多过 20 年的经验生产优越的 MHC 染色试剂包括我们世界领先的Pro5® MHC Class I 类五聚体。定制 ProT2® 四聚体可得到在大约六周。
(A) Data from Prof Paul Moss group, University of Birmingham, UK
(B) Data from H-2IAb/2W1S from Dr David Withers group, University of Birmingham, UK
Figure 1. (A) CMV-阳性和 CMV-阴性的捐赠者的外周血单个核细胞（PBMC）样本染上了 DRB1*07:01/PDDYSNTHSTRYVTV ProT2® 四聚体。在左边的两个染色图展现细胞样本来自CMV阳性捐赠者；在右边的两个染色图展现了细胞样本来自CMV-阴性捐赠者。在染色图里的右上角显示了CD4+ 四聚体阳性细胞在于 CMV 阳性捐赠者染上了 ProT2® 四聚体。每一个染色图是射门在活性，CD19-，CD14-和 CD3+ 的淋巴细胞。(B) 在对照的脾细胞和 2W1S 多肽免疫小鼠射门在活性，CD3+，CD8- CD4+ 事件， 染上了ProT2® 四聚体。
传统功能化验用来研究抗原特异性 CD4+ T 细胞，比如增殖或细胞因子分泌，这些都不是真正抗原特异性的反应。最直接检测抗原特异性 CD4+ T 细胞一直以来都不容易，因为 T 细胞的频率很低（在十万白细胞内，只含有一个 T 细胞）还有功能亲和力很低，因为 MHC 多肽和 T 细胞受体 的亲和力很低，这减少了 T 细胞受体集群和辅助受体的影响。ProT2® 四聚体的优化制造过程提高了再生性和敏感性，所以能够帮助以上的困扰在于检测抗原特异性 CD4+ T 细胞。
ProImmune 提供 ProT2® 四聚体带着快速的反应，专业技术支持和客户服务。订购我们 ProT2® 四聚体比起自己内部或非商业的最大优点是，您不需要申请然后等试剂的到来也不需要提供多肽。ProT2® 四聚体能够在迅速的交货期也经过我们严格的质量控制和低的批次可变性。因此 ProT2® 四聚体能补充 ProImmune 现在的 Pro5® 五聚体技术检测抗原特异性 CD8+ T 细胞。
Kramer C. et al. (2020). “Generation and reactivity analysis of human recombinant monoclonal antibodies directed against epitopes on HLA-DR” AJT DOI: 10.1111/ajt.15950
Figure 2. HLA-DR-specific memory B cell clones isolated from peripheral blood using ProT2® MHC Class II Tetramers. A, Representative example of 3 independent experiments depicting the flow cytometry gating strategy to live single cell sort CD3-CD27+IgD-HLA-DR tetramer double positive B cells from PBMC. B, IgG antibody production by the clones was determined by ELISA. C, IgG positive clones were screened with HLA class II Lifecodes Lifescreen Deluxe kit to detect HLA antibody. The kit contains 5 groups of HLA class II beads and each data point represents a single bead group. D, HLA-specific B cell clones were tested with SAB assays to confirm tetramer specificity used for cell sorting. Each dot presents 1 clone and only MFI of bead with tetramer specificity is depicted. E, Percentage of sorted HLA-specific B cells from total memory B cells. F, Percentage of HLA antibody-producing B cell clones from sorted B cells. On the x-axis are the specificity of the tetramers used depicted.
50，150 测试
ProT2® 四聚体提供成的荧光标记含有 R-PE 或 APC 标记选项。或者，客户可以购买然后自己链接我们的 ProM2® MHC Class II 类单体用适当的链霉试剂。
广泛的 MHC Class II 复合物特异在许多不同的感染病毒比如流感，巨细胞病毒（CMV），乙型肝炎（HBV），丙型肝炎（HCV），艾滋病（HIV），爱泼斯坦巴尔病毒（EBV）还有癌症相关的抗原表位可得到的目录 ProT2® 四聚体。ProT2® 四聚体目录表库存能在 3 周发货。ProT2® 四聚体目录表
定制您想得要的 MHC 等位基因和多肽在大概 6 周。多肽序列会经过 ProImmune 的专业评估在于结合亲和力。当我们接受之后我们就会开始合成您的定制 ProT2® 四聚体。
ProT2® 四聚体能够一起共用和其他已确立的 Class II 四聚体在实验室。
HLA-DR1 (DRB1*01:01); DR2 (DRB1*15:01); DR3 (DRB1*03:01); DR4 (DRB1*04:01); DRB1*04:02; DRB1*04:05; DR5 (DRB1*11:01); DR7 (DRB1*07:01); DR9 (DRB1*09:01); H-2 IAb; H-2 IAd; IAg7
ProImmune 有广泛的经验在内部检测 ProT2® MHC Class II 类四聚体内各种应用的方法。这使我们能够完全协助我们客户在于相关的应用需求还有帮助客户最有效用这个技术。
Figure 3: 健康捐赠者外周单个核细胞（PBMC）用了多肽 PKYVKQNTLKLAT (Influenza A HA 307‑319) 激活，培养 13天，然后染了DRB1*01:01/PKYVKQNTLKLAT ProT2® 四聚体。在左边的两个染色图展现了细胞样本没有用多肽激活；在右边的两个染色图展现了同样的细胞样本用了多肽激活。在染色图的右上角显示了 CD4+ 四聚体阳性细胞从多肽激活 HLA-DRB1*01:01 捐赠者的细胞样本。每一个染色图射门在活性，CD19- 的淋巴细胞。
ProT2® 四聚体也可一用在研究 CD4+T 细胞免疫反应在于感染病毒比如 CMV（看上面 figure 1）和 HCV，还有疫苗研究。
Data from Dr Georg Lauer group, Massachusetts General Hospital, Boston
Figure 4: HCV 阳性的捐赠者的外周单个核细胞（PBMC）用 ProT2® 四聚体染色。在左边的染色图里的右上角显示了CD4+ 四聚体阳性细胞来之 HCV 阳性的 HLA-DRB1*04:01 捐赠者细胞样本用了 DRB1*04:01/SGIQYLAGLSTLPGNPAIASL ProT2® 四聚体染色。在右边的染色图里的右上角显示了CD4+ 四聚体阳性细胞来之 HCV 阳性的 HLA-DRB1*01:01 捐赠者细胞样本用 DRB1*01:01/TLLFNILGGWVAA ProT2® 四聚体染色。每一个染色图片射门在活性，CD19-，CD14-，CD3+ 的淋巴细胞。
Data from Prof Ellie Barnes group, University of Oxford, UK
Figure 5: 接种 HCV 疫苗捐赠者的外周单个核细胞（PBMC）用了多肽NFPYLVAYQATVCARA 激活细胞然后培养。过了12 和 22天，细胞样本用了DRB1*15:01/NFPYLVAYQATVCARA ProT2® 四聚体染色。CD4+ 四聚体阳性的细胞显示在染色图片的右上角来之 HLA-DRB1*15:01 的捐赠者。每一个染色图射门在活性，CD3+ 淋巴细胞。
为了帮助检测较低频率的细胞群超出 Class II 四聚体检测限，可需要采用扩张 [1，2] 或用磁珠增幅 [3，4]；虽然有些较低亲和力的抗原有可能没法显示可检测的染色。
ProT2® MHC Class II 四聚体（APC 标记）
ProT2® MHC Class II 四聚体（R-PE 标记）
ProT2® MHC Class II 四聚体（阴性对照）
Hartnell F. et al. (2020). Characterising HCV specific CD4+ T-cells following viral-vectored vaccination, directly acting anti-virals and spontaneous viral cure. https://doi.org/10.1002/hep.31160
Cianciotti B. et al. (2019). CD4+ memory stem T cells recognizing citrullinated epitopes are expanded in patients with rheumatoid arthritis and sensitive to tumor necrosis factor blockade. https://doi.org/10.1002/art.41157
Kramer C. et al. (2020). Generation and reactivity analysis of human recombinant monoclonal antibodies directed against epitopes on HLA-DR. https://doi.org/10.1111/ajt.15950
Gliwinski M. et al. (2020). Proinsulin-specific T regulatory cell may control immune responses in type 1 diabetes: implications for adoptive therapy. 10.1136/bmjdrc-2019-000873
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